Родилась 8 ноября 1864 г. (27 октября 1864 г. по старому стилю) в Санкт-Петербурге в семье русского оперного певца и музыкального педагога Федора Петровича Комиссаржевского. Ее родная сестра - Надежда Скарская (1868-1958) - русская и советская актриса театра и кино; сводный брат - Федор Комиссаржевский (1882-1954) - русский и советский театральный режиссер.
В 1887 г. Вера Комиссаржевская начала брать уроки актерского мастерства у Владимира Давыдова.
В 1889 г. впервые выступила на любительской сцене Санкт-Петербургского Морского собрания флотского экипажа в постановке по пьесе "Горящие письма" Петра Гнедича. Затем под псевдонимом Комина принимала участие в спектаклях Константина Станиславского в Обществе искусства и литературы в Москве. В 1893-1894 гг. была задействована в постановках у антрепренера Николая Синельникова в г. Новочеркасске (ныне в Ростовской области). В 1894-1896 гг. работала в антрепризе Константина Незлобина в г. Вильно (ныне Вильнюс, Литва), где исполнила около 60 ролей.
В апреле 1896 г. Вера Комиссаржевская дебютировала на сцене Александринского театра (ныне Национальный драматический театр России - Александринский, Санкт-Петербург), сыграв роль Рози в спектакле по пьесе Германа Зудермана "Бой бабочек". За шесть лет работы на императорской сцене актриса исполнила роли Ларисы из пьесы "Бесприданница" Александра Островского, Софьи из комедии "Горе от ума" Александра Грибоедова, Маргариты из драмы "Фауст" Иоганна Гёте, Нины Заречной из пьесы "Чайка" Антона Чехова и др. Роль Нины Заречной впоследствии была признана критиками одной из лучших в ее сценической карьере.
В 1902-1904 гг. Вера Комиссаржевская гастролировала по стране с целью собрать средства на открытие собственного театра. В сентябре 1904 г. в концертном зале Санкт-Петербургского "Пассажа" (ныне Торговый центр "Пассаж") актриса открыла свой Драматический театр, в котором в дальнейшем сыграла героинь из пьес Генрика Ибсена, Максима Горького, Евгения Чирикова, Сергея Найденова, Герхарта Гауптмана, Антона Чехова и др. Наиболее яркой, по мнению критиков, была роль Норы из пьесы Генрика Ибсена "Кукольный дом". Первое время постановочную часть театра возглавлял Федор Комиссаржевский, в 1906-1907 гг. режиссером-постановщиком в театре работал Всеволод Мейерхольд.
Игра Комиссаржевской отличалась повышенной эмоциональностью и тревожным лиризмом. В своих сценических образах актриса выражала драму женской души, существующей в строго регламентированном патриархальном обществе.
Весной 1908 г. Вера Комиссаржевская совершила гастрольную поездку в США, после этого отправилась в длительное турне по России.
Вера Комиссаржевская скончалась от оспы 23 февраля (10 февраля по старому стилю) 1910 г. в Ташкенте (ныне столица Узбекистана) на 46-м году жизни. Была похоронена на Никольском кладбище Александро-Невской лавры в Санкт-Петербурге. В 1936 г. прах актрисы был перенесен в Некрополь мастеров искусств Александро-Невской лавры.