Родился 14 июня 1968 г. в г. Нефтекамске в Башкирии.
В 1985 г. поступил в псковский филиал Ленинградского политехнического института (ныне в составе Псковского государственного университета), где обучался в течение года. В 1993 г. окончил Тюменский государственный университет по специальности "правоведение", в 1997 г. там же получил второе высшее образование по специальности "финансы и кредит" (квалификация "экономист").
Кандидат экономических наук. В 2005 г. в Тюменском государственном нефтегазовом университете защитил диссертацию на тему "Программно-целевое управление территориальным развитием сложнопостроенного региона".
В 1986-1988 гг. проходил срочную службу в Вооруженных силах СССР.
В 1993 г. работал юрисконсультом в филиале Западно-Сибирского коммерческого банка (Запсибкомбанк) в г. Надыме Ямало-Ненецкого АО. В 1994-1995 гг. был и. о. директора, в 1995-1997 гг. - директором филиала Запсибкомбанка.
С мая 1997 г. по апрель 1998 г. - вице-президент - директор салехардского филиала, затем первый вице-президент Запсибкомбанка.
С 29 апреля 1998 г. занимал должность президента ОАО "Запсибкомбанк".
В декабре 2000 г. - январе 2001 гг., в период кампании по выборам губернатора Тюменской области, был председателем инициативной группы по выдвижению Сергея Собянина на пост руководителя региона, также являлся его доверенным лицом.
В 2001 г., после избрания Сергея Собянина губернатором Тюменской области, Владимир Якушев перешел на работу в обладминистрацию. 13 июня 2001 г. он был назначен заместителем губернатора.
В марте 2005 г. – первый заместитель главы администрации Тюмени Степана Киричука.
В марте - апреле 2005 г. исполнял обязанности главы администрации Тюмени. 14 апреля 2005 г. был избран на пост главы города депутатами гордумы.
В 2005-2018 гг. – губернатор Тюменской области.
23 ноября 2005 г. глава государства Владимир Путин внес в Тюменскую областную думу кандидатуру Владимира Якушева для утверждения в должности руководителя региона. 24 ноября депутаты регионального парламента единогласно наделили Якушева полномочиями губернатора. В тот же день он вступил в должность. 12 октября 2010 г. Владимир Якушев вновь был утвержден на посту главы Тюменской области по представлению президента РФ Дмитрия Медведева. Депутаты облдумы единогласно поддержали его кандидатуру. 24 ноября 2010 г. губернатор вступил в должность.
17 мая 2014 г. президент РФ Владимир Путин принял досрочную отставку Владимира Якушева с поста губернатора Тюменской области, назначив его временно исполняющим обязанности руководителя региона.
14 сентября 2014 г. Владимир Якушев победил на прямых выборах главы Тюменской области (баллотировался от партии "Единая Россия"), получив 86,56% голосов избирателей. Его ближайший соперник, заместитель председателя комитета по бюджету, налогам и финансам областной думы Михаил Селюков (ЛДПР), набрал 6,21%. 25 сентября того же года Владимир Якушев официально вступил в должность. Занимал пост губернатора до мая 2018 г.
С 18 мая 2018 г. по 9 ноября 2020 г. - министр строительства и жилищно-коммунального хозяйства РФ. Сменил во главе ведомства Михаила Меня.
С 9 ноября 2020 г. - полномочный представитель президента РФ в Уральском федеральном округе. Сменил на этом посту Николая Цуканова.
С 16 ноября 2020 г. - член Совета безопасности РФ.
15 июня 2024 г. председатель партии "Единая Россия" Дмитрий Медведев назначил Владимира Якушева врио секретаря генерального совета партии. Во главе генсовета он сменил Андрея Турчака, который ранее указом президента РФ был назначен врио главы Республики Алтай.
Входит в высший совет и бюро высшего совета политической партии "Единая Россия" (с 2012 г.), в президиум регионального политсовета партии в Тюменской области.
Член Государственного совета РФ. В 2006, 2008 и 2014 гг. был членом президиума Госсовета РФ.
Член попечительского совета Фонда развития территорий.
Действительный государственный советник РФ I класса (2020).
Награжден орденами Почета (2008) и "За заслуги перед Отечеством" IV степени (2012). Имеет благодарность президента РФ (2009).
Почетный гражданин Тюменской области (2018).