Родился 14 июня 1968 г. в г. Нефтекамске в Башкирии.
В 1985 г. Владимир Якушев поступил в псковский филиал Ленинградского политехнического института (ныне в составе Псковского государственного университета), где обучался в течение года. В 1993 г. окончил Тюменский государственный университет по специальности "правоведение", в 1997 г. там же получил второе высшее образование по специальности "финансы и кредит" (квалификация "экономист").
Кандидат экономических наук. В 2005 г. в Тюменском государственном нефтегазовом университете защитил диссертацию на тему "Программно-целевое управление территориальным развитием сложнопостроенного региона".
В 1986-1988 гг. проходил срочную службу в Вооруженных силах СССР.
В 1993 г. работал юрисконсультом в ямало-ненецком филиале Западно-Сибирского коммерческого банка (Запсибкомбанк, г. Надым).
В 1994-1995 гг. был и. о. директора, в 1995-1997 гг. - директором ямало-ненецкого филиала Запсибкомбанка.
С мая 1997 г. по апрель 1998 г. - вице-президент - директор салехардского филиала, затем первый вице-президент Запсибкомбанка.
С 29 апреля 1998 г. занимал должность президента ОАО "Запсибкомбанк".
В декабре 2000 г. - январе 2001 гг., в период кампании по выборам губернатора Тюменской области, был председателем инициативной группы по выдвижению Сергея Собянина на пост руководителя региона, также являлся его доверенным лицом.
В 2001 г., после избрания Сергея Собянина губернатором Тюменской области, Владимир Якушев перешел на работу в обладминистрацию. 13 июня 2001 г. он был назначен заместителем губернатора.
В марте 2005 г. – первый заместитель главы администрации Тюмени Степана Киричука.
В марте - апреле 2005 г. исполнял обязанности главы администрации Тюмени. 14 апреля 2005 г. был избран на пост главы города депутатами Тюменской гордумы.
В 2005-2018 гг. – губернатор Тюменской области.
23 ноября 2005 г. глава государства Владимир Путин внес в Тюменскую областную думу кандидатуру Владимира Якушева для утверждения в должности руководителя региона. На следующий день, 24 ноября, депутаты регионального парламента единогласно наделили Якушева полномочиями губернатора. В тот же день он вступил в должность. 12 октября 2010 г. Владимир Якушев вновь был утвержден на посту главы области по представлению президента РФ Дмитрия Медведева. Депутаты тюменской облдумы единогласно поддержали его кандидатуру. 24 ноября 2010 г. Якушев вступил в должность.
С 2012 г. член высшего совета и бюро высшего совета политической партии "Единая Россия". Входит в состав президиума регионального политсовета партии в Тюменской области.
17 мая 2014 г. президент РФ Владимир Путин принял досрочную отставку Владимира Якушева с поста губернатора Тюменской области, назначив его временно исполняющим обязанности руководителя региона.
14 сентября 2014 г. Владимир Якушев победил на прямых выборах главы региона (баллотировался от партии "Единая Россия"), получив 86,56% голосов избирателей. Его ближайший соперник, заместитель председателя комитета по бюджету, налогам и финансам областной думы Михаил Селюков (ЛДПР), набрал 6,21%. 25 сентября того же года Владимир Якушев официально вступил в должность.
Будучи губернатором Тюменской области дважды - в 2007 и 2011 гг. - баллотировался в Государственную думу РФ V и VI созывов в составе федерального списка кандидатов, выдвинутого партией "Единая Россия" (возглавлял тюменскую региональную группу). После выборов отказывался от депутатского мандата.
С 18 мая 2018 г. по 9 ноября 2020 г. занимал должность министра строительства и жилищно-коммунального хозяйства РФ. Сменил во главе ведомства Михаила Меня.
9 ноября 2020 г. указом главы государства Владимира Путина назначен полномочным представителем президента РФ в Уральском федеральном округе. Сменил на этом посту Николая Цуканова.
С 16 ноября 2020 г. - член Совета безопасности РФ.
19 сентября 2021 г. был избран депутатом Государственной думы РФ VIII созыва по списку партии "Единая Россия" (баллотировался под первым номером региональной группы №9, Курганская, Тюменская об., ХМАО, ЯНАО). После выборов отказался от депутатского мандата.
Член Государственного совета РФ. В 2006, 2008 и 2014 гг. входил в состав президиума Госсовета РФ.
Член попечительского совета Фонда развития территорий.
Награжден орденами Почета (2008) и "За заслуги перед Отечеством" IV степени (2012).
Почетный гражданин Тюменской области (2018).